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培养基揭示无血清培养基的常规使用方法和基本配方

点击次数:695 更新时间:2014-07-23
 

培养基揭示无血清培养基的常规使用方法和基本配方

    目前,血清仍是动物细胞培养基中zui基本的的添加物,尤其是在原代培养或者细胞生长状况不良时,常?;嵯仁褂糜醒宓呐嘌航信嘌?,待细胞生长旺盛以后,再换成无血清培养液。细胞转入无血清培养基培养要有一个适应过程,一般要逐步降低血清浓度,从10%减少到5%,3%,1%,直至无血清培养。在降低过程中要注意观察细胞形态是否发生变化,是否有部分细胞死亡,存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。在实验后这些细胞一般不再继续保留,很少有细胞能够长期培养于无血清培养基而不发生改变的。细胞转入无血清培养之前,要留有种子细胞,种子细胞按常规培养于含血清的培养基中,以保证细胞的特性不发生变化。

    用于生物制药和疫苗的细胞在体外培养时,多数呈贴壁生长或兼性贴壁生长;而当其在无血清、无蛋白培养基中生长时,由于缺乏血清中的各种粘附贴壁因子如纤粘连蛋白、层粘连蛋白、胶原、玻表粘连蛋白,细胞往往以悬浮形式生长。

  添加组分包括以下几大类物质

  (1)促贴壁物质:许多细胞必须贴壁才能生长,这种情况下无血清培养基中一定要添加促贴壁和扩展因子,一般为细胞外基质,如纤连蛋白、层粘连蛋白等。它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子,对许多细胞的繁殖和分化,起着重要作用。纤连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化,这些细胞包括成纤维细胞、肉瘤细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞等。

  (2)促生长因子及激素:针对不同细胞添加不同的生长因子。激素也是刺激细胞生长、维持细胞功能的重要物质,有些激素是许多细胞*的,如胰岛素。

  (3)酶抑制剂:培养贴壁生长的细胞,需要用胰酶消化传代,在无血清培养基中*须含酶抑制剂,以终止酶的消化作用,达到?;は赴哪康?。zui常用的是大豆胰酶;抑制剂。

  (4)结合蛋白和转运蛋白:常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比较大,可增加培养基的粘度,?;は赴馐芑邓鹕恕P矶嘈脚嘌奈扪迮嘌己信Q灏椎鞍?。

  (5)微量元素:硒是zui常见的。 

 
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