保存Anti-ACA11样本避免降解,核心是?「抑制蛋白酶活性+避免反复冻融+低温稳定存储」?,针对提取前组织、提取后蛋白样本有不同规范,具体操作:
一、提取前拟南芥组织保存
新鲜取材后,立即放入?预冷的研钵?,或用液氮快速速冻1分钟,冻成硬块后转移到-80℃冰箱长期保存,禁止放在4℃室温放置超过30分钟;
需要长期保存(超过1个月)的组织,推荐用?RNAlater固定液?浸泡后4℃过夜,再转移到-80℃,能有效抑制蛋白酶活性,避免靶标降解。
二、提取后蛋白样本保存(最关键环节)
?提取全程控酶?:裂解液必须提前添加?蛋白酶抑制剂混合物?,全程冰上操作,取材到提取完成控制在1小时以内;
?必须小份分装?:提取完成定量后,按?单次实验用量?分装(比如WB一次用20~50μg,就按对应体积分装成10~20μl/管),绝对不要大体积保存;
?选择合适存储温度?:短期保存(1周内)可放-20℃,长期保存(超过1周)必须放在?-80℃冰箱?,-80℃能延缓蛋白降解,保存时间比-20℃长3~5倍;
?禁止反复冻融?:每次实验仅取出1管使用,剩余分装始终保持冻存状态,用后的剩余蛋白直接丢弃,不要重新冻存。
三、固定样本(IHC/免疫荧光用)保存规范
新鲜组织固定后,石蜡包块放在4℃密封保存,避免受潮,可保存1~2年;
冰冻切片组织固定后,放在-20℃密封避光保存,每次取用快速取出,避免解冻潮解,可保存半年左右。
按照以上方法保存,Anti-ACA11样本在-80℃可稳定保存6~12个月,不会发生明显降解。